Publicación: Evaluación de la expresión de los genes LPL y AP2 en células madre derivadas de tejido adiposo sometidas a inducción adipogénica
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Resumen en español
RESUMEN: El tejido adiposo es una gran fuente de obtención de células madre mesenquimales con potencial de diferenciación a linajes celulares específicos como el adipogénico. Esta diferenciación in vitro se ha investigado con el fin de utilizar tales células como parte de terapias reconstructivas y regenerativas de tejido blando. El método más utilizado para comprobar la diferenciación de las células es por medio de tinción con Oil Red O, que sirve como indicador de acumulación lipídica. Sin embargo, éste no es un indicador de diferenciación terminal. Debido a esto, se buscó evaluar la expresión de los genes que codifican para la lipoproteína lipasa (LPL) y la proteína adipogénica 2 (aP2), marcadores adipogénicos, en células madre derivadas de tejido adiposo sometidas a inducción adipogénica, y de esta manera comprobar si la diferenciación fue exitosa. Para esto se aislaron células madre de muestras de lipoaspirado, se cultivaron y se llevaron a un proceso de inducción adipogénica por 21 días. Durante tal proceso, se observaron cambios morfológicos y aparición de vacuolas lipídicas, características propias de adipocitos maduros. Se realizaron extracciones del ARN total de las células en los días 7,14 y 21 de diferenciación. Se aplicó técnica RT-qPCR para amplificar los genes elegidos y cuantificar su expresión. Por medio de esta técnica se pudo identificar una sobreexpresión de los marcadores adipogénicos en las células sometidas a diferenciación, principalmente durante etapa final del proceso de inducción. Este resultado llevó a determinar que el protocolo utilizado para diferenciar células ADAS hacia células del tejido adiposo, efectivamente permite obtener células con características genéticas de los adipocitos maduros.
Resumen en inglés
ABSTRACT: Adipose tissue is a rich source of mesenchymal stem cells with differentiation potential to specific cell lineages such as adipogenic. This in vitro differentiation has been investigated in order to use these cells as part of reconstructive and regenerative therapy of soft tissue. The method used to check the differentiation of the cells is by staining with Oil Red O, which serves as an indicator of lipid accumulation. However, this is not an indicator of terminal differentiation. Because of this, it was sought to evaluate the expression of genes that encode lipoprotein lipase (LPL) and adipocyte protein 2 (aP2), adipogenic markers, on stem cells derived from adipose tissue under adipogenic induction, and thereby determine whether the differentiation was successful. To do that, stem cells were isolated from lipoaspirate samples, they were cultured and then took into adipogenic induction process for 21 days. During this process, morphological changes, the emergence of lipid vacuoles and characteristics of mature adipocytes were observed. Extractions of total RNA from cells in 7, 14 and 21 days of differentiation were made. RT-qPCR technique was used to amplify and quantify selected genes expression. Through this technique could be identified the overexpression of adipogenic markers in cells undergoing differentiation, especially during the final stage of the induction process. This result led to a determination that the protocol used for ADAS cells to differentiate into fat cells indeed possible to obtain cells with genetic characteristics of mature adipocytes.