Examinando por Materia "Proteínas recombinantes"

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    PublicaciónAcceso abierto
    Estandarización de métodos ligados a la producción de proteínas recombinantes para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas
    (Universidad EIA, 2022) Vanegas Torres, Laura; Sánchez Jiménez, Miryan Margot; Ospina Villa, Juan David; Osorio Pulgarín, Maria Isabel
    RESUMEN: La enfermedad de Chagas (EC) es una enfermedad infecciosa. Presenta dos fases clínicas: aguda y crónica, esta última es caracterizada por complicaciones como cardiomiopatía, megacolon y megaesófago. Para su diagnóstico, actualmente existen retos en la etapa de identificación de la infección que permitan aportar al tratamiento y alivio de la enfermedad. Desde el ICMT-CES se encuentra en desarrollo una nueva prueba basada en proteínas recombinantes para la detección de anticuerpos contra T. cruzi. El desarrollo de esta nueva prueba busca contribuir en la detección de la EC en sitios endémicos en Colombia, reducir la cadena de diagnóstico, disminuir costos en la adquisición de pruebas respecto a otras pruebas desarrolladas en el exterior, entre otros. Con el fin de lograr el desarrollo de la prueba en primer lugar se analizó la competencia de dos proteínas recombinantes previamente sintetizadas en un trabajo anterior (CRP y SAPA) y en segundo lugar se trabajó en la estandarización de los procesos de transformación y expresión de una tercera proteína recombinante en proceso de síntesis (WD). En cuanto a la primera parte se encontró una contaminación que hacía inviables las proteínas recombinantes CRP y SAPA para el diagnóstico efectivo de la EC y por lo tanto es necesario sintetizarlas nuevamente y referente a la segunda parte se determinó que la proteína WD resulta ser tóxica para el modelo procariota por lo que es necesario pasar a un modelo eucariota para su síntesis.
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    ÍtemAcceso abierto
    Producción de Tth ADN polimerasa recombinante en un modelo procariota
    (2024-09) Torres Gómez, Isaura Patricia; Osorio, M.; Gil, S.; Botero, S.; Melo, M.; Flórez, J.; Gómez, O.
    Los biotecnológicos son macromoléculas producidas mediante la tecnología ADN recombinante con aplicaciones industriales significativas. En Colombia, la demanda de proteínas recombinantes, como la Tth ADN polimerasa utilizada en PCR, no está cubierta por una industria local, lo que resulta en altos costos. Este estudio se enfoca en estandarizar la producción a escala analítica de Tth ADN polimerasa recombinante en E. coli BL21-AI, a partir de la determinación de las condiciones óptimas de crecimiento del hospedero transformado con un plásmido, las condiciones de inducción de la expresión de la enzima, la evaluación de la producción mediante SDS-PAGE, y la purificación del producto. El protocolo incluyó la preparación de medios selectivos con kanamicina, activación del clon de E. coli desde un stock de glicerol, preinóculo, y almacenamiento de células pre- y post-inducción. La inducción se hizo con L-arabinosa e IPTG, seguida de cosecha, purificación con cromatografía de afinidad y evaluación por SDS-PAGE. Los resultados preliminares consisten en la producción de la biomasa en medios de cultivo inducidos y suplementados con kanamicina a escala de 1 L, observándose bandas de aproximadamente 94 kDa en el SDS-PAGE, correspondientes a la Tth polimerasa, tras el análisis electroforético de la masa bacteriana concentrada antes y después de inducir y tras la purificación. Estos resultados preliminares indican que el sistema de producción de la enzima recombinante es funcional, con viabilidad confirmada del clon productor y recuperación de la enzima tras inducción. Sin embargo, es necesario optimizar las condiciones de almacenamiento post-fermentación y purificación para maximizar la cantidad de proteína pura obtenida.